排列三2元彩票:瞬時轉染與穩定轉染

2元彩票券 www.hzgenk.com.cn 哺乳動物細胞表達系統具有促使蛋白正確折疊和實現復雜修飾的功能,表達的蛋白更近天然狀態,能夠運用于制藥等活性要求高的領域。利用哺乳動物細胞表達系統生產蛋白通常有兩種方式:瞬時轉染穩定轉染(構建穩定細胞系),這兩種方式在原理、操作流程、應用場景上均有所區別,本文主要就瞬時轉染與穩定轉染之間的區別做一介紹。

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瞬時轉染與穩定轉染實驗原理的異同

瞬時轉染與穩定轉染都是將目的基因轉染至特定哺乳動物細胞內,進而表達得到目的蛋白。不同的是瞬時轉染的方式外源基因并沒有轉染到細胞的染色體上而是存在于游離的載體上,這樣可以在短時間內獲得基因的表達產物,但是隨著細胞的不斷分裂增殖外源基因最終會丟失,無法繼續進行重組蛋白的生產;而利用細胞穩定轉染則會將外源基因轉染至細胞染色體上,目的基因不會隨著細胞傳代而消失,穩定轉染的細胞株能夠長期穩定的生產目的蛋白。

圖1:瞬時轉染與穩定轉染原理對比

圖1:瞬時轉染與穩定轉染原理對比

實驗操作的差別

  • 1. 瞬時轉染與穩定轉染所用的質粒是不同的,瞬轉的質粒不需要帶有抗性,而用于穩定轉染的質粒一定要帶有特定的抗性以便于后續的克隆株篩選。另外,兩者所用的培養基及實驗試劑也有所區別。
  • 2. 瞬時轉染的操作比構建穩定細胞系的操作簡單,構建好質粒后,經過細胞復蘇、轉染、細胞培養、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白;而構建穩定細胞系需要先將構建好的質粒線性化,再導入培養好的哺乳動物細胞內,通過一定的轉染方式實現質粒與細胞的融合,接著經過細胞池篩選、單克隆篩選、細胞傳代培養等步驟才能得到穩定轉染的細胞系。對穩定細胞系進行培養能夠長期穩定的生產目的蛋白。

圖2:瞬時轉染實驗流程

圖3:細胞穩定轉染實驗流程

瞬時轉染與穩定轉染優缺點對比

瞬時轉染 穩定細胞系構建
優點
  1. 能夠快速生產得到微量至中量的重組蛋白
  2. 實驗成本低
  3. 一個宿主可以帶有多個拷貝,表達效率高
  1. 能夠長期穩定生產目的蛋白
  2. 得到穩轉株之后后續生產蛋白的成本大大降低
  3. 能夠對基因進行基因插入、基因敲除等編輯操作
缺點 無法長期生產得到重組蛋白 實驗成本高、周期長、操作難度大

應用場景

瞬時轉染表達和穩定轉染表達最顯著的區別就是在時間上。瞬時轉染在轉染后四天即能收獲細胞,瞬時轉染一般用于基因產物的短期表達、蛋白質的小規模合成。相對于瞬時轉染,穩定轉染表達適用于長期的藥理學研究遺傳調控機制研究及大規模的蛋白質合成,需要大量的周期,因此更費力成本投入高。目前,在進行哺乳動物細胞蛋白表達時,因為細胞培養技術的進步和人們對瞬時轉染的不斷探索,人們已經可以對一些常用細胞進行懸浮培養,實現了瞬時轉染對重組蛋白的大規模合成,節省了時間和成本。

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