2元彩票网11选5:蛋白表達常用培養基及緩沖液配置

蛋白表達常用培養基

TB培養基配置

2元彩票券 www.hzgenk.com.cn Tryptone 7.2g,yeast 14.4g,甘油3g,磷酸氫二鉀9.86g,磷酸二氫鉀1.4g,去離子水攪拌溶解,定容至600ml(可分裝成兩瓶使用),其他量依次放大;

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LB液體培養基配置

Tryptone 1g,yeast 6g,氯化鈉1g,去離子水溶解攪拌,定容至100ml;其他量依次放大;
固體LB培養基,按照1.5%的量加入瓊脂

2xYT培養基配置

Tryptone 9.6g,yeast 6g,氯化鈉3g,去離子水攪拌溶解后定容至600ml;其他量依次放大;

MD選擇培養基配置

在80ml的去離子水中加入2g瓊脂糖,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L);

MM選擇培養基配置

在90ml的去離子水中加入2g瓊脂糖(20g/L),120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),0.5ml甲醇(0.5%);

10xYNB配置

134gYNB固體溶于1L的去離子水中,過濾滅菌,4℃保存;

YPD完全培養基

Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,葡萄糖20g/L,固體培養基添加1.5%的瓊脂;

RDB轉化培養基配置

山梨醇186g/L,瓊脂糖20g/L,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),100xAA 1ml,攪拌混勻,倒平板(配置100ml滅菌時加入80ml水即可);

100xAA (每種氨基酸0.5%)配置

準確稱取L-谷氨酸,L-亮氨酸,L-異亮氨酸,L-賴氨酸,L-甲硫氨酸各500g溶于100ml去離子水中,過濾滅菌,4℃保存;

BMGY誘導表達培養基配置

Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氫二鉀3g/L,磷酸二氫鉀11.8g/L,加水至890ml,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甘油10ml;

BMMY誘導表達培養基配置

Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氫二鉀3g/L,磷酸二氫鉀11.8g/L,加水至895ml,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甲醇5ml;

500x B(0.02%生物素)配置

生物素20mg/100ml去離子水,過濾滅菌,4℃保存;

10xBasal Salts發酵培養基配置

NH4H2PO4 50g/L,CaSO4 0.93g/L,K2SO4 18.2g/L,MgSO4·7H2O 14.9g/L,KOH3g/L,葡萄糖50g/L,磷酸二氫鉀5g/L;

上述培養基YNB,甲醇,生物素,氨基酸過濾除菌,葡萄糖108℃滅菌30min,其余120℃高壓滅菌20min;

SDS-PAGE凝膠配置

A液:丙烯酰胺29.2g,甲叉雙丙烯酰胺0.8g,去離子水攪拌溶解,定容至100ml;

B液:Tris 18.2g,加800ml去離子水,調pH至8.8,加入4ml 10% SDS,定容至100ml;

C液:Tris 6.05g,加30ml的去離子水,調pH至6.8,加入2ml 10% SDS,定容至50ml;

D液:10% SDS

AP:10%過硫酸銨:5g(0.5g)過硫酸銨,溶于50mL(5mL)去離子水中;現配現用或分裝至0.5mL離心管中冷凍備用。

TEMED:TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,低溫保存。

不同濃度的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠配置

溶液成分 不同體積的凝膠各成分的體積(ml)
6 % 5 10 15 20 25 30 40 50
2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5
30% A液 1 2 3 4 5 6 8 10
1.5mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
10% AP 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04
12%
1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5
>30% A液 2 4 6 8 10 12 16 >20
1.5mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
10% AP 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02
15 %
1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5
30% A液 2.5 5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5
1.5mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
10% AP 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02

瓊脂糖凝膠配置配置

根據要分離的樣品(DNA)大小配制合適濃度的瓊脂糖凝膠。準確稱取一定量的瓊脂糖干粉,加入到合適體積的錐形瓶中,加入一定量的電泳緩沖液(30ml左右TAE);放入到微波爐內加熱融化,冷卻片刻(不燙手即可);融化后的瓊脂溶液搖晃混勻,倒入電泳槽中,等其凝固;室溫下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的凝膠4℃保存;

蛋白表達常用緩沖液

SDS-PAGE電泳緩沖液配置

配制1L,在1L燒杯中準確稱取Tris3.0g,甘氨酸14.4g,SDS1.0g,,去離子水攪拌溶解,定容至1L;

Western blot轉膜緩沖液配置

配制1L,在1L燒杯中準確稱取Tris5.8g,甘氨酸2.9g,SDS0.37g,甲醇200ml,加入去離子水攪拌溶解,定容至1L;

SDS-PAGE上樣緩沖液配置

① 5xLoading buffer

配制50ml,在1L的燒杯中,準確稱取Tris 0.9g,甘油32.5g,SDS 5g,DTT2.75g,溴酚藍0.125g,加入適量去離子水攪拌溶解,定容至50ml;

② 2xLoading buffer

配制50ml,在1L的燒杯中,準確稱取60mM Tris 0.36g,20%甘油13g,4% SDS 2.0g,150mM DTT 1.10g,

0.1%溴酚藍0.05g,加入適量去離子水攪拌溶解,定容至50ml;

SDS-PAGE電泳染色液配置

R250(1L):在合適體積的燒杯中,準確稱取R2501.0g,甲醇450ml,乙酸100ml,充分的溶解。

SDS-PAGE電泳脫色液配置

1L:冰乙酸100ml,甲醇100ml,充分混勻,室溫放置;

1X PBS pH7.4配置

500ml 1XPBS,在合適體積的燒杯中,準確稱取140mM氯化鈉4.1g,2.7mM氯化鉀0.1g,10mM NaH2PO4·12H2O 1.79g,1.8mM磷酸二氫鉀 0.122g,用480左右ml去離子水攪拌溶解,調pH為7.4,定容至500ml;

1xTAE

配置500ml1XTAE ,準備合適體積的燒杯,準確稱取Tris 2.42g,乙酸0.571ml,EDTA(Na)0.186g,加入去離子水攪拌溶解,定容至500ml;

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