2元彩票中500万的:配對抗體的制備與篩選

2元彩票券 www.hzgenk.com.cn 配對抗體指的是可以同時結合在一個抗原分子上的兩個抗體。配對抗體,一般應用于雙抗夾心法ELISA實驗。下載

抗體配對的原理

通常情況下,一個抗原分子擁有多個抗原決定簇,將抗原注射入動物體內進行免疫,針對不同的抗原決定簇會產生不同的抗體。產生的抗體具有特異性與專一性,即一個抗體分子只會特異性地結合一個抗原決定簇。兩個針對不同抗原決定簇的抗體,有可能同時結合到抗原分子上。如果兩個抗體同時結合到同一個抗原分子上,那么這兩個抗體就是配對抗體。

配對抗體的制備與篩選

需要注意的是,即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇,也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結合。當一個抗體與抗原結合后,有可能會導致其他結合位點(抗原決定簇)構型的改變,從而導致其他的抗體無法正常結合到抗原上。位阻效應的存在,也可能使兩個結合位點距離較近的抗體無法同時結合在抗原上。因此想要得到可以同時結合在抗原分子上的配對抗體,在制備出抗體后,還需要對得到的抗體進行篩選。這就意味著,要制備配對抗體,要完成以下兩步工作:抗體的制備;配對抗體的篩選。

抗體制備

為了便于后續的篩選,制備的抗體應為單克隆抗體,通常利用雜交瘤技術進行單克隆抗體的制備(詳細操作流程請見:雜交瘤制備單克隆抗體實驗流程)。
注意:如果單克隆抗體很少,很可能會找不到可以配對的抗體,因此,在免疫動物的時候,應多免疫幾只動物,以獲得更多的單克隆抗體(德泰生物為您提供>10只以上小鼠的免疫,篩選配對抗體)。

配對抗體的篩選

通常,配對抗體篩選的方法是雙抗夾心ELISA法。篩選的原理為:在得到了單克隆抗體后,從中取出兩種單克隆抗體,一種作為捕獲抗體,另一種作為標記抗體(HRP酶標記),將捕獲抗體包被在抗原板上,先加入抗原,孵育后洗去未結合的抗原,再加入標記抗體 孵育后洗去未結合的標記抗體,最后加入顯色液顯色。如果可以顯色,說明標記抗體與抗原特異性結合,該捕獲抗體與標記抗體為一對配對抗體。如果不能顯色,說明標記抗體不能與抗原結合,從而被洗脫,該捕獲抗體與標記抗體不是配對抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進行配對,則需重新選擇兩種單抗,重新進行試驗,直至找出可以配對的抗體。

雙抗夾心法ELISA篩選配對抗體原理圖1:雙抗夾心法ELISA篩選配對抗體原理

配對抗體的應用

利用雙抗夾心法對目的抗原進行定性定量的檢測,必須要用到可以同時與目的抗原結合的配對抗體。對于比較常見的目的抗原,可以通過購買試劑盒的方式得到相應配對抗體。但是市面上試劑盒的種類有限,有些目的蛋白在市面上無法買到對應的試劑盒,為了進行雙抗夾心法ELISA實驗,需進行相應的配對抗體的生產。

相關服務

抗體配對服務:準備的配對用的抗體≥10株,雙抗夾心ELISA實驗,OD值≥陽性對照。

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